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细胞培养易出现的问题解析

日期:2018/2/26 17:51:47 点击次数 1951 发布单位:天义生物谷  录入:李清

    摘要:做细胞培养的同学如果互相交流会发现,不同的实验室有些规则是不一样的,初学者经常不知对错,今天就和大家总结一下这些纠结的问题,希望对你的细胞之路有所帮助。


细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?


    除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。


可否使用与原先培养条件不同之培养基?


    不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。


可否使用与原先培养条件不同之血清品牌?


    可以,但是不能频繁更换。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。更换不同品牌的血清之初,可能细胞会有一个短暂的适应过程,适应后,好的血清会促进细胞良好生长。建议选择合适的放心品牌血清,而不是在假货横行的当下选择昂贵的大牌血清,因为高价格大品牌是假货的重灾区。即使买到正品,也肯定造成了资金的浪费。Clark血清致力于打造国内第一放心品牌血清,从销售渠道控制、革命性外包装、反馈跟踪体系和重奖打假四个方面入手,开国内先河,保证每一瓶都是正品,让用户放心。


培养基中是否须添加抗生素?


    除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。


细胞冷冻培养基之成份为何?


    动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 %原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意:由于DMSO 稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成。 


DMSO之等级和无菌过滤之方式为何?


    冷冻保存使用之DMSO等级,必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650),其本身即为无菌状况,第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于4 C,避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质,并可减少污染之机会。若要过滤DMSO,则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜。

 
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